빛과 어둠의 기사들 사이에서 전쟁이 그칠 줄 모르고 계속 되던 중세 시대의 어느 날, 한 명의 인간 중재자를 통해 기나긴 전쟁은 끝을 맺는다. 그러나 빛의 세력과 어둠의 세력 간의 견제는 계속 되고, 수세기 동안 인간 세계에서 위태위태한 균형을 유지하게 된다.

1992년 모스크바. 아내의 외도를 목격한 안톤(콘스탄틴 카벤스키 분)은 그녀의 마음을 돌리려고 마녀를 찾아갔다가 어둠의 세력을 감시하는 나이트 워치를 만난다. 그리고 자신이 빛과 어둠의 능력을 모두 가진 특별한 존재 임을 알게 된 안톤은, 낮에는 전력 회사 사장이자 밤에는 나이트 워치로 활동하는 보리스 게서(블라디미르 멘쇼프 분)의 도움을 받으면서 어둠의 세력에 대항해 나간다. 반면, 빛의 감시자들인 데이 워치는 수장 자블론의 지휘 아래 호시탐탐 어둠의 세상이 오기만을 기다린다.

그렇게 12년이 흐른 2004년 어느 날, 어둠의 세력을 감시하던 안톤은 한 어린 아이를 뒤쫓다가 그들의 무서운 음모를 감지하게 된다. 이에 안톤은 세상이 어둠의 세력에게 지배되는 것을 막기 위해 최후의 일전을 시작하는데…